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ClockWork 1.4.0 web to PC 클럭 동기화 장치는 원자 시계와 동기화하여 PC 클럭을 정확하게 유지합니다. 시스템 트레이 작업이나'일반'창에서 백그라운드로 실행할 수 있습니다. LAN을 지원합니다. 위에서 설명한 프로토콜은 Photorhabdus luminescens Tc 복합체 (TcdA1) 20 , 21 , 22 의 A 구성 요소의 112 개의 직접 검출기 영화에서 시작하여 실행되었습니다. 이 데이터 세트는 300 kV의 가속 전압에서 작동되는 고휘도 전계 방출 총 (XFEG)이있는 Cs 보정 전자 저온 현미경으로 기록되었습니다. 이미지는 표본 규모에서 1.14 Å의 픽셀 크기에서 60 e - / Å -2 의 총 선량으로 자동 획득되었습니다. 무비 프레임 정렬 후 (프로토콜 단계 2), 결과로 얻은 모션 보정 평균은 등방성 톤 링을 고해상도까지 확장합니다 (그림 2a). 개개의 입자는 쉽게 보이고 잘 분리되어있었습니다 (그림 2b). 그런 다음 입자를 e2boxer의 득점 도구를 사용하여 선택했습니다.lass = "xref"> 18 (프로토콜 단계 4.1). 이 경우,보다 선별적인 옵션을 사용하여 적절한 임계 값이 설정되었습니다 (그림 2c). 112 개의 디지털 현미경 사진은 9,652 개의 입자를 산출했다. 추출 된 이미지 (프로토콜 단계 4.2)의 대부분은 잘 정의 된 입자를 포함하고 상자 크기는 권장 된 FX 통화 것처럼 입자 크기보다 1.5 배 정도 컸다 (그림 2d). 다음으로 ISAC을 사용하여 2D 이질성 분석을 수행했습니다 (프로토콜 단계 5). 98 개의 클래스 평균을 산출했다 (그림 3a). 이러한 2D 클래스 평균을 사용하여 중간 해상도 (그림 3b)에서 VIPER (프로토콜 단계 6)를 사용하여 ab initio 모델을 계산했습니다. 이 모델은 3.9Å 해상도에서 이미 해결 된 TcdA1의 결정 구조와 우수한 일치를 보여준다 (그림 3c). 이 ab initio 모델은 초기 온도로 사용되었다. (MERIDIEN)을 사용하여

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